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魚(yú)ELISA試劑盒樣品采集及血清分離中要注意避免細(xì)菌污染

更新時(shí)間:2018-08-28      瀏覽次數(shù):2124
魚(yú)ELISA試劑盒樣品收集和保存:
用于ELISA測(cè)定常用的臨床標(biāo)本是血清(漿)。要注意避免嚴(yán)重溶血,因?yàn)檠t蛋白中含有具有類似過(guò)氧化物活性的血紅素基團(tuán),在孵育時(shí)很容易吸附于固相,與HRP底物反應(yīng)產(chǎn)生假陽(yáng)性。
魚(yú)ELISA試劑盒樣品采集及血清分離中要注意避免細(xì)菌污染,一方面細(xì)菌分泌的酶可能對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用,另一方面,細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會(huì)對(duì)相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
魚(yú)ELISA試劑盒樣品應(yīng)該要避免反復(fù)凍融。因反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。另外,樣品混勻時(shí),不要?jiǎng)×艺袷?,反?fù)顛倒混勻即可。
一般而言,如果在收集樣品的當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè),可將樣品及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?;而?duì)隔天再檢測(cè)的樣本,應(yīng)及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,若要長(zhǎng)期保存樣品,好將其置于-70℃凍存。
實(shí)驗(yàn)具體步驟:
1、魚(yú)ELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備
在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,需將試劑盒從冰箱中拿出來(lái)在室溫放置20min,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡,也可使溫育時(shí)反應(yīng)孔內(nèi)的溫度能較快的達(dá)到所要求的高度,以滿足測(cè)定要求。
其次,目前商品中ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)其所提供的濃縮液進(jìn)行稀釋配制,因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)該保證質(zhì)量。此外,底物反應(yīng)液應(yīng)該反應(yīng)顯色前進(jìn)行現(xiàn)配現(xiàn)用。同時(shí),為了保證實(shí)驗(yàn)的均一性,實(shí)驗(yàn)中所有試劑在加樣前必須搖勻。
2、魚(yú)ELISA試劑盒加樣
因ELISA的靈敏度較高,則應(yīng)該按規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù),以降低非特異性反應(yīng),使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來(lái)。
加樣品時(shí),單孔用量要求:≥20ul/指標(biāo),如需要做2個(gè)復(fù)孔則血量≥60ul/指標(biāo)。如果用量充足,好提供50ul/孔/指標(biāo)。具體用量也需根據(jù)試劑盒的要求而定。
吸取樣品時(shí),加樣槍頭不應(yīng)粘附多余的液體;加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體,否則會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上,加樣不準(zhǔn)確。正確加樣方法應(yīng)為45度,吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入。
加樣時(shí)速度不可過(guò)快,否則無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性;要避免樣品加在孔壁上部而產(chǎn)生非特異性吸附。不可將樣品濺出以避免對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。 
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